Отсяда в Германския институт за хранителни изследвания (III)

Доклад за стаж

Стаж в DIfE Potsdam-Rehbrücke
от 7 до 18 октомври 2019 г.
От Antje Soeken

Благодарение на Дните на науката в Аурих, успях да направя двуседмичен стаж в Германския институт за хранителни изследвания в Потсдам по време на есенната пауза. Исках да стажувам в Германския институт за хранителни изследвания, защото искам да насоча кариерата си в областта на храненето. В Немския институт за хранителни изследвания бях назначен в областта на диабетологията под ръководството на професор Шюрман. Лицето ми за контакт беше д-р. Leager, постдокът на моя ръководител Тереза.

ден 1

На първия ден бях приет от секретаря, който ми показа института и ми даде лабораторно палто и ключове за шкафчето и лабораторията.

След това се запознах с д-р. Леджър и екипът му представиха. Изследването е за избягване на диабет тип 2. Диабет тип 2 е, когато органите станат устойчиви на инсулин, който трябва да стимулира органите да абсорбират глюкозата. Ако обаче органите са устойчиви на инсулин, глюкозата се абсорбира малко или никак. Това кара панкреаса да произвежда повече инсулин, защото смята, че има повече глюкоза, тъй като тя не се абсорбира. След известно време панкреасът е сериозно повреден и произвежда по-малко или никак повече инсулин.

Чрез изследвания върху диетите те откриха, че кръвната захар при диабетици тип 2 не е толкова висока при диета с ниско съдържание на протеини, колкото при други диети. Това повдигна въпроса „защо?“. Защо тези, които са на диета с ниско съдържание на протеини, абсорбират глюкозата от кръвта си, а тези на друга диета не?

Оказа се, че протеинът FGF21 се произвежда в черния дроб чрез диета с ниско съдържание на протеини, което кара тялото да забележи, че има нужда от енергия и по този начин стимулира органите да абсорбират глюкозата. FGF21, което означава „Фактор за растеж на фибробластите 21“, по този начин поема ролята на инсулин. Пълното избягване на протеините обаче е много трудно и почти непоносима диета. След това се обмисля дали човек трябва да приема не само определен вид основен протеин, а това е метионинът. Човек избягва метионин, като следва диета с ниско съдържание на месо.

След това на срещата на екипа ме поздрави професорът и те обсъдиха задачи за следващата седмица.

След това гледах как ръководителят ми Тереза работи върху западен парцел, който може да се използва за определяне размера на протеините. По-късно приготвих чаши на Петри за бъдещи изследвания на островни клетки.

ден 2

Вторият ден започна с приготвянето на ястия на Петри отново. След това ми показаха клетъчната лаборатория, където клетките се отглеждат за различни експерименти. По-късно направих тест с Тереза за експеримент за следващия ден, в който черният дроб беше отстранен от мишка, за да се получи материал за по-нататъшни изследвания.

След обедната почивка извърших определяне на протеин с друг стажант, в който протеините се сравняват със стандартите. Това продължи до края на работния ден, защото трябваше да пипетираме много, което се оказа много отнемащо време.

Ден 3

На сутринта аз и моят ръководител подготвихме лабораторията за планирания експеримент върху мишката. Това е мишка B7, те са много тънки и са на възраст около 10-18 седмици в експеримента. Изложихме всички необходими неща и смесихме решенията за експеримента.

След като всичко беше подготвено, първата мишка беше обезболена. След няколко минути беше проведен тест, за да се определи дали мишката вече не може да усети нищо. След това се отваряше в корема и стомахът с тънките и дебелите черва беше внимателно изложен от тялото, за да се разкрие кухата вена. В кухата вена беше поставена игла, която изпомпва буфера 1 през нея. Междувременно порталната вена се отваря, за да може кръвта да излезе от тялото. Буфер 1 прави черния дроб по-лек и малко по-голям. След известно време буфер 1 се заменя с буфер 2. Буфер 2 гарантира, че чернодробните клетки се разтварят в черния дроб.

Когато черният дроб стане гъбест, той се изрязва от тялото. Черният дроб се поставя върху текстилен участък и се свива с чифт пинсети. Черният дроб става течен. След това чернодробните клетки бяха доведени в контакт с буфер 3 и центрофугирани. В резултат на това желаните клетки се отлагат на пода и „отпадъците“ се носят в буфер 3. Буфер 3 се изхвърля внимателно, пресен буфер 3 се добавя към чернодробните клетки и клетките се отстраняват внимателно от пода с помощта на пипета. Отново се центрофугира и буферът 3 се изхвърля отново. След това се отчита малка част от протеините, която след това се изчислява въз основа на размерите и след това се изчислява колко микролитра са в дадена област. Към клетките се добавя друго вещество, което е като храна за клетките. Клетките могат да оцелеят около три дни.

Ден 6

На сутринта приготвих върховете на пипетата за автоклава и след това приготвих чашите на Петри. След това продължихме експеримента от ден 3. Обработихме получените клетки с антитела, за да отделим протеините от тях. Преброихме тези протеини с помощта на машина, т.е.направихме определяне на протеин. FGF21 също се брои, за да се установи зависимостта или връзката между FGF21 и протеините.

Ден 7

На сутринта отново подготвих накрайници за пипета за автоклава. Тогава аз и моят ръководител искахме да повторим експеримента от ден 3. За съжаление обаче не успяхме да завършим експеримента, тъй като не се получи поради възникнали проблеми. Следобед помогнах на друга докторантка с подготвителната й работа за експеримент. Тя извади органите от осем мишки, които след това претеглих и документирах. Измерих и нивата на кръвната захар на мишките. След това замразих органите с помощта на течен азот.

Ден 8

На осмия ден за първи път наблюдавах как убивахме мишки, за да стигнем до панкреаса. Когато панкреасът беше изложен, колагеназата се инжектира в съседния кръвоносен съд, което води до подуване на панкреаса и става гелообразна маса. След това панкреасът беше отстранен от тялото на мишката с възможно най-малък контакт, за да се предотврати изтичането на островни клетки. Повторихме процеса на седем други мишки. Тогава моят ръководител преброи островните клетки в отделния панкреас. Следобед, за да практикувам пипетиране, извърших още едно определяне на протеин с лаборанта, тъй като пипетирането е важно умение в областта на лабораторните изследвания.

Ден 9

Този ден направихме уестърн петно. Протеините се прехвърлят в носеща мембрана. За целта първо направихме гел, който трябваше да почива известно време. След това добавихме много малки цветни пигменти. След това гелът беше поставен в устройство, което беше напълнено с течност и наелектризирано, така че протеините да текат надолу през гела.

След около час и половина цветните пигменти достигат до дъното и в гела се появяват изолирани малки цветни маркировки. След това гелът се поставя върху мембранна хартия и се увива във филтърна хартия и гъби в друго устройство, което гарантира, че протеините от гела се прехвърлят към мембранната хартия. По-късно мембранната хартия се измива няколко пъти с разтвор и след това се потенцира с подобно на мляко вещество. След около 30 минути се засилва допълнително в студена среда.

Ден 10

В последния ден приготвих определени вещества за по-нататъшни експерименти. Също така измих и изсуших мембранната хартия няколко пъти. След това го оценихме в машина. По обяд започнах заминаването си.

Заключение

Наистина се насладих на стажа в DIfE, защото бях посрещнат горещо и беше много поучително за мен. Беше много забавно и много интересно да се види как работи в лаборатория. Особено ми хареса лабораторната работа.

Също така получих представа за изследванията и едва сега наистина мога да си представя как работят. Има много общо с офисната работа и трябва да направите много изследвания и да поискате, преди дори да можете да започнете. Също така осъзнах, че много изследвания не работят и е истински въпрос на търпение да напреднете в научните изследвания. Това беше хубаво вникване в професионалния свят. Познах много хора, които всички са учили в различни области и получих много съвети.