Филип Пиер Маркверт

От Института по вирусология към Университета Хайнрих Хайне Дюселдорф Директор: Унив.-проф. Д-р мед. Jörg Timm Серологично и молекулярно откриване на инфекции с човешки полиомавируси JC и BK при пациенти с прогресивна мултифокална левкоенцефалопатия (PML) дисертация за придобиване на степен доктор по медицина в Медицинския факултет на Университета Хайнрих Хайне Дюселдорф, представена от Филип Пиер Маркверт 2018

филип

Отпечатана като встъпителна дисертация с одобрението на Медицинския факултет на Университета Хайнрих Хайне Дюселдорф. подписан: Декан: Унив.-проф. Д-р мед. Николай Кльокер Първи рецензент: проф. Д-р мед. Ortwin Adams Втори рецензент: PD Dr. мед. Филип Албрехт

Публикувани са части от тази работа: Индексът на антителата CSF JCV за диагностика на ПМЛ, свързан с натализумаб. Warnke C, von Geldern G, Markwerth P, Dehmel T, Hoepner R, Gold R, Pawlita M, Kümpfel T, Mäurer M, Stangel M, Wegner F, Hohlfeld R, Straeten V, Limmroth V, Weber T, Hermsen D, Kleinschnitz C, Hartung HP, Wattjes MP, Svenningson A, Major E, Olsson T, Kieseier BC, Adams O. Annals of neurology 2014, дек. 76 (6): 792-801.

Списък на съкращенията 5HT2A 5-хидрокситриптаминов рецептор 2A AI JCV AKT ANOVA ATP AU BKV BSA CCD CSF/серумен коефициент на антитяло-JCV протеин киназа B Анализ на дисперсията Аденозин 5 трифосфат произволна единица BK вирус Говежди серумен албумин, свързана с такса, приспособление D DMSO Desoxy Време за измерване 1 DMSO Deso дезоксирибонуклеиновата киселина DX1 време на измерване 2 DX2 време на измерване 3 Е.коли Ешерихия коли EDTA етилендиаминтетраоцетна киселина EIA ензимна имуносорбентен анализ ELISA ензимно-свързан анализ имуносорбентен FAM 6-карбокси-флуоресцеин HAART високо активна антиретровирусна G Ig-IgM-IgM-immunopropyl контрол β-имуноглобулин IgM-IgM-IgM-immunopropyl β-имуно-контрол IgM-IgM-immunopropyl β-имуноглобулин G Ig-имуноглобулин G-β-имуно-контрол контрол IgM-immunopropyl IgM-IgM-immunopropyl терапия D-тиогалактопиранозид JCV JC вирус kbp килобаза двойки KI доверителен интервал LB лизогенен бульон LPOS нисък положителен контрол MAPK митоген-активирана протеин киназа mirna микро РНК ml милилитри MPOS среден контрол mrna messenger РНК MRI магнитен резонанс MRZ морбили-рубеола-зостер MS множествена склероза средни средни стойности NAT natalizumab II

NCCR некодиращ контролен регион NEM N-Ethylmaleimide NF-1/X ядрен фактор-1 клас X NLS ядрен локализационен сигнал nm нанометър OD X оптична плътност при x nm PBS фосфатно буфериран физиологичен разтвор разтворен антиген PML прогресивна мултифокална левкоенцефалопатия PP2A протеин фосфатаза 2A prb ретинобласт qpcr количествена полимеразна верижна реакция РНК рибонуклеинова киселина SAPK активирана от стрес протеин киназа SEM стандартна грешка S-фаза синтез фаза SMPB сукцинимидил 4- [р-алеймидофенил] -бутират SV-40 маймунен вирус 40 TAMRA тетраметил-родамин T-антиген тумор антиген U единици VP-1 вирус протеин 1 2 VP-1 вирус протеин 1 2 VP-1 вирус протеин 1 2 VP-3 вирус протеин 3 ЦНС централна нервна система III

Съдържание 1 Въведение 1 1.1 Полиомавируси. 1 1.1.1 Класификация. 1 1.1.2 Морфология. 2 1.2 JC вирус. 4 1.2.1 История. 4 1.2.2 Морфология и вирусни протеини. 4 1.2.3 Геном. 6 1.2.4 Цикъл на репликация. 6 1.2.5 Типове и подтипове. 8 1.2.6 Патогенеза. 8 1.2.7 Епидемиология. 10 1.2.8 Терапия. 10 1.3 Множествена склероза. 11 1.4 Натализумаб. 12 1.5 Издание. 13 2 Материал и методи 14 2.1 Материал на пациента. 14 2.2 Рекомбинантен JCV-BKV-IgG ELISA. 15 2.2.1 Принцип. 15 2.2.2 Получаване на рекомбинантен протеин VP-1. 16 2.2.3 Anti-JCV/Anti-BKV IgG ELISA. 18 2.2.4 Рекомбинантен JCV IgG подклас ELISA. 21 2.2.5 Измервания на афинитет с помощта на рекомбинантен JCV-IgG ELISA. 22 2.3 MRZ реакция/индекс на Рейбер. 24 2.4 Определяне на протеин в Брадфорд. 25 2.5 Количествена PCR в реално време. 26 3 Оценка 28 3.1 ELISA. 28 3.1.1 Анти-JCV IgG. 28 3.1.2 Анти-BKV IgG. 31 3.1.3 КЧС/серумен коефициент. 33 3.1.4 Подкласове на анти-JCV IgG. 35 3.1.5 Анти-JCV и анти-BKV IgM. 36 3.1.6 Афинитет срещу JCV IgG. 40 3.2 PCR резултати. 41 3.2.1 Резултати от групите за сравнение. 41 3.2.2 JCV ДНК. 43 3.2.3 BKV-ДНК. 44 IV

Съдържание 4 Дискусия 45 4.1 JCV IgG. 45 4.2 BKV IgG. 47 4.3 CSF/серумен коефициент. 48 4.4 JCV IgG подкласове. 49 4.5 JCV IgM. 50 4.6 BKV IgM. 51 4.7 Анти-JCV IgG афинитет. 52 4.8 PCR-JCV. 53 4.9 PCR-BKV. 54 5 Заключение 55 6 Библиография 56 V

1 Въведение Фиг. 1.1: Класификация на семейството Polyomaviridae; Фиг. Модифициран според Polyomaviridae Study Group на Международния комитет по таксономия на вирусите. 3

1 Въведение Множествената склероза (МС) с хуманизираното анти-алфа-4-интегриново антитяло Натализумаб (Tysabri) може също да се появи като сериозен страничен ефект на ПМЛ. 12,22,50 Фиг. 1.4: ЯМР изображения на пациент с ПМЛ. Хиперинтензивните медуларни огнища са показани в дясното полукълбо темпоро-тилна (червени стрелки). Илюстрацията е любезно предоставена от Priv.-Doz. Д-р мед. Майкъл Мъл, Клиника за диагностична и интервенционна неврорадиология, Университетска клиника Аахен. 9